· पोलिएक्रिलामाइडजेललाई एक्रिलामाइड मोनोमर, पोलिमराइजेशन सुरु गर्ने सामग्री, उत्प्रेरक, र नुन र बफर मिश्रणको दायाँ सँगै मिलाएर बनाउनु पर्छ।
· एक्रिलामाइडर BIS (N, N '- मिथिलिन डबल एक्रिलामाइड) मोनोमर रूप जेल म्याट्रिक्स हो।
· अमोनियम पर्सल्फेटले टाँस्ने पोलिमराइजेसन प्रक्रिया सुरु गर्छ। ग्लुको निर्माणको लागि पानीमा तयार पारिएको १०% अमोनियम पर्सल्फेट घोल चाहिन्छ। धेरैजसो जानकारीले सक्रिय प्रयोगको आवश्यकतालाई संकेत गर्छ। यद्यपि, १०% घोललाई गतिविधिमा उल्लेखनीय क्षति बिना धेरै हप्तासम्म ४℃ मा राख्न सकिन्छ। १० मिलिलिटरसम्म बनाउनुहोस् र ग्लु जम्मा हुन नसकेपछि खारेज गर्नुहोस्।
सुझाव: प्रतिशतएक्रिलामाइडअनुक्रमणमा ग्लु र प्रोटिन ग्लु एउटै हुँदैनन्। यदि पूर्वनिर्मित एक्रिलामाइड: BIS घोल प्रयोग गर्दै हुनुहुन्छ भने, सही बोतल लिन निश्चित गर्नुहोस्।
· TEMED (N, N, N ', N ' - टेट्रामिथाइल इथाइलिनडायमिन) एक उत्प्रेरक हो, खैरो बोतलमा, फ्रिजमा राखिएको। ग्लु खन्याउनु अघि थप्नुहोस्।
· इलेक्ट्रोफोरेसिसमा प्रयोग गरिएको पोलीएक्रिलामाइड इलेक्ट्रोफोरेसिस गिलास प्रत्येक पटक अघि र पछि धुनुपर्छ। इलेक्ट्रोफोरेसिस पछि, तातो साबुन पानीमा नरम ब्रश र कपडाले धुनुहोस्, आसुत पानीले कुल्ला गर्नुहोस् र सुक्न दिनुहोस्।
· ओसिलोपन र धुलो खोक्रो पोलिमरले निम्त्याउन सक्छ। इलेक्ट्रोफोरेसिस गर्नु अघि, गिलासको प्लेटलाई गिलास क्लिनरले सफा गर्नुहोस् र नरम ब्रशले पुछ्नुहोस्। डिस्टिल्ड पानीले धुनुहोस् र पेपर वाइपले राम्ररी सुकाउनुहोस्। कागजले पुछ्नु अघि ७०% इथेनॉलले कुल्ला गर्नाले सफा गर्न र सुकाउने गति बढाउन मद्दत गर्छ। क्रमिक रूपमा एक्रिलामाइडका नमूनाहरू थप्नुहोस्: BIS, पानी, बफर घोल, अमोनियम पर्सल्फेट, TEMED। राम्रोसँग हल्लाउनुहोस् र तुरुन्तै खन्याउनुहोस्।
पोलिमराइजेसन गर्नुअघि पोलिएक्रिलामाइडलाई डिग्यास गर्नु आवश्यक छैन। (अक्सिजनले पोलिमराइजेसनलाई रोकेकोले बुलबुले हटाउन एक्रिलामाइडलाई भ्याकुममा राखिन्थ्यो।)
तेर्सो ग्लु पोइन्ट नमूना सुझावहरू।
· तलको बक्समा कालो कागजको टुक्रा राख्नुहोस्, कालो पृष्ठभूमिमा केही नमूना प्वाल बनाउनुहोस् ताकि अझ स्पष्ट रूपमा देख्न सकियोस्।
· ग्लु ट्याङ्कीले भरिएको बफर, कोलोइडको ठीक माथि।
· यदि किनारामा बत्ती छ भने, बत्ती बाल्नुहोस्, कोलोइडलाई प्रकाश दिन दिनुहोस्। नमूनालाई पिपेटमा तान्नुहोस्।
· स्वचालित पाइपेटिङ उपकरण प्रयोग गर्दै।
· १०-२०० mu मा १ तरल गतिशील बिन्दु नमूनाको धेरैजसो बिन्दुहरूमा प्रयोग गर्न सकिन्छ। धेरै सानो नमूना प्वालहरू (१०μ१ भन्दा कम) को लागि, अनुक्रमण ग्लुको लागि प्रयोग गरिएको लामो पिपेट हेड बढी सुविधाजनक हुन्छ।
· नमुनामा डुबाएर बिस्तारै चल्ने तरल पदार्थ सास लिँदै गर्दा पाइपेटिङ। नमूना ग्लिसरीनले टाँसिने देखिन सक्छ, र छिटो पम्प गर्दा पिपेटको टाउकोमा हावाका बुलबुलेहरू तान्न सक्छन्।
· पाइपेटिङ हेडलाई सास फेरेपछि, नमूनाहरूले तरल पदार्थको टाउकोलाई पाइपको किनारमा बिस्तारै सार्नेछन् वा कागज पुछ्नेछन् र तरल पदार्थको टाउकोलाई थोपाहरू बाहिर निकाल्नेछन्। नमूना नचोस् भन्ने कुरामा सावधान रहनुहोस्।
नमूनालाई नमूना प्वालमा राख्नुहोस्
· थोरै दबाब राख्न पाइपेटिंग उपकरण, नमूनाहरूलाई ओभरफ्लो लिक्विड हेडलाई थोरै सार्न लगाउनुहोस्।
· बफरमा घुसाइएको पाइपेटिङ हेड, स्पट प्वालहरू भन्दा अलि माथि, सकारात्मक चाप कायम राख्छ। पिपेटको टुप्पो सानो प्वालमा घुसाउन सकिन्छ।
· बिस्तारै र स्थिर रूपमा नमूनाहरू बाहिर निकाल्नुहोस्। पिपेटको टुप्पो नमूना प्वालको बिन्दु माथि राखिएको छ, र नमूना प्वालमा डुब्नेछ। नमूनालाई भित्र धकेल्नुको सट्टा नमूना प्वाल भर्न डुब्न दिनुहोस्।
· तरल टाउको भएको नमुनाको अन्तिम थोपा निस्किएपछि, तरल पदार्थ दोस्रो खुट्टामा सर्नेछ, बिस्तारै तरल पदार्थलाई माथि उठाउनेछ, बफरबाट बाहिर निस्कनेछ।
ठाडो ग्लु नमूना कसरी गर्ने?
· दुईवटा गिलासका टुक्राहरू बीच बनाइएका ठाडो ग्लु पोइन्ट नमुना प्वालहरू। धेरै पातलो ग्लुमा, पिपेट टाउको दुई गिलास प्लेटहरू बीच पनि घुसाउन सकिँदैन। ग्लिसरीनलाई ध्यान दिनुहोस्! पिपेट टाउकोलाई नमूना प्वालमाथि राख्नुहोस् र नमूना प्वालमा डुब्नेछ।
· नमूना बिन्दु गर्नु अघि, पोलिप्रोपाइलिन एसिल जेल नमूना प्वालको ठाडो बिन्दुलाई सफासँग पखाल्नुहोस्। अनपोलिमराइज्ड एक्रिलामाइड र नमूना प्वालको तल देखा पर्न सक्ने पानीलाई धुनुहोस्। पानीले नमूना प्वाललाई उल्लेखनीय रूपमा सानो बनाउन सक्छ। २५ मिली वा ५० मिली सिरिन्ज र १८-गेज सुई प्रयोग गर्नुहोस्। इलेक्ट्रोफोरेसिस बफरमा खन्याउनुहोस् र नमूना प्वाललाई सावधानीपूर्वक फ्लश गर्नुहोस्।
· नमूना प्वाल हेर्न गाह्रो हुन सक्छ, तर बाँकी काम पनि सजिलो छ। यदि त्यहाँ धेरै प्वालहरू छन् भने, नमूना बफरलाई ब्रोमोफेनोल नीलोले परीक्षण गर्न सकिन्छ।
पोस्ट समय: मार्च-३१-२०२३