Polyacrylamide जेल इलेक्ट्रोफोरेसिसको लागि सावधानीहरू

· polyacrylamideजेल एक्रिलामाइड मोनोमर, पोलिमराइजेशन सुरु गर्ने सामग्री, उत्प्रेरक, र नुन र बफर मिश्रणको दायाँ सँगै हुनुपर्छ।

· acrylamideर BIS (N, N'- methylene double acrylamide) मोनोमर फारम जेल म्याट्रिक्स हो।

· अमोनियम persulfate टाँसने polymerization प्रक्रिया सुरु। ग्लुको निर्माणको लागि पानीमा तयार 10% अमोनियम पर्सल्फेट समाधान चाहिन्छ। धेरैजसो जानकारीले सक्रिय प्रयोगको आवश्यकतालाई संकेत गरेको छ। यद्यपि, 10% समाधान गतिविधिको महत्त्वपूर्ण हानि बिना धेरै हप्ताको लागि 4℃ मा राख्न सकिन्छ। 10 एमएल सम्म बनाउनुहोस् र ग्लु जम्मा गर्न असफल हुँदा खारेज गर्नुहोस्।

सुझाव: को प्रतिशतacrylamideसिक्वेन्सिङ ग्लु र प्रोटिन ग्लु एउटै हुँदैन। यदि पूर्वनिर्मित एक्रिलामाइड प्रयोग गर्दै हुनुहुन्छ: BIS समाधान, सही बोतल प्राप्त गर्न निश्चित गर्नुहोस्।

· TEMED (N, N, N ', N' - tetramethyl ethylenediamine) एक उत्प्रेरक हो, खैरो बोतलमा, फ्रिजमा राखिन्छ। गोंद खन्याउनु अघि मात्र थप्नुहोस्।

· इलेक्ट्रोफोरेसिसमा प्रयोग गरिएको पोलीएक्रिलामाइड इलेक्ट्रोफोरेसिस गिलास प्रत्येक पटक अघि र पछि धुनुपर्छ। इलेक्ट्रोफोरेसिस पछि, तातो साबुन पानीमा नरम ब्रश र कपडाले धुनुहोस्, डिस्टिल्ड पानीले कुल्ला गर्नुहोस् र सुकाउन खडा गर्नुहोस्।

· ओसिलो र धुलोले खोक्रो पोलिमरको कारण हुन सक्छ। इलेक्ट्रोफोरेसिस गर्नु अघि, गिलास क्लीनरको साथ गिलास प्लेट सफा गर्नुहोस् र यसलाई नरम ब्रशले पुछ्नुहोस्। डिस्टिल्ड पानीले धुनुहोस् र पेपर वाइपले राम्ररी सुकाउनुहोस्। कागजले पुछ्नु अघि ७०% इथानोलले कुल्ला गर्नाले सफा गर्न र सुकाउने गति बढाउन मद्दत गर्छ। क्रमिक रूपमा acrylamide को नमूनाहरू थप्नुहोस्: BIS, पानी, बफर समाधान, अमोनियम persulfate, TEMED। राम्रोसँग हल्लाउनुहोस् र तुरुन्तै खन्याउनुहोस्।

पोलिमराइजेसन अघि polyacrylamide degass गर्न आवश्यक छैन। (एक्रिलामाइडलाई बुलबुले हटाउन भ्याकुममा राखिन्थ्यो किनभने अक्सिजनले पोलिमराइजेशनलाई रोक्छ।)

तेर्सो गोंद बिन्दु नमूना सुझावहरू।

· तलको बक्समा कालो कागजको टुक्रा राख्नुहोस्, अझ स्पष्ट रूपमा हेर्नको लागि केही नमूना प्वाल बनाउन कालो पृष्ठभूमि।
· कोलोइड माथि ग्लु ट्याङ्की भरिएको बफर।
· यदि किनारमा बत्ती छ भने, बत्तीहरू खोल्नुहोस्, प्रकाश कोलोइड चम्काउन दिनुहोस्। पिपेटमा नमूना कोर्नुहोस्।
· स्वचालित पाइपिङ उपकरण प्रयोग गर्दै।
· 10-200 mu मा 1 तरल चल बिन्दु नमूनामा धेरै बिन्दुहरूमा प्रयोग गर्न सकिन्छ। धेरै सानो नमूना प्वालहरू (10μ1 भन्दा कम) को लागि, गोंद अनुक्रमणिका लागि प्रयोग गरिएको लामो पिपेट टाउको अधिक सुविधाजनक छ।

· बिस्तारै चलिरहेको तरल पदार्थलाई सास गर्दै नमूनामा मात्र डुबेर पाइपिङ। नमूना ग्लिसरीनले टाँसिएको देखिन सक्छ, र द्रुत पम्पिङले पिपेट टाउकोमा हावाका बुलबुले तान्न सक्छ।

· पाइप्टिङ्ग टाउको सास लिइसकेपछि नमूनाहरूले पाइपको छेउमा तरल टाउको बिस्तारै सार्नेछ वा थोपाहरू बाहिर तरल टाउकोलाई पुछ्ने कागज चुस्नेछ। नमूना चुस्न नदिनुहोस् सावधान हुनुहोस्।

नमूना प्वालमा नमूना राख्नुहोस्

· पाइपिङ यन्त्रलाई थोरै दबाब राख्नको लागि, नमूनाहरूलाई थोरै ओभरफ्लो तरल टाउको सार्न बनाउनुहोस्।
· बफरमा सम्मिलित पाइपिङ हेड, स्पट होल भन्दा अलि माथि, सकारात्मक दबाब कायम राख्नुहोस्। पिपेटको टिप सानो प्वालमा घुसाउन सकिन्छ।
· बिस्तारै र स्थिर रूपमा नमूनाहरू बाहिर। पिपेट टिप बिन्दु नमूना प्वाल माथि राखिएको छ, र नमूना प्वाल मा डुब्न हुनेछ। भित्र धकेल्नुको सट्टा नमूना प्वाल भर्न नमूना डुब्न दिनुहोस्।
· तरल टाउकोको साथ नमूनाको अन्तिम थोपा एक पटक, तरल दोस्रो खुट्टामा सर्नेछ, तरल चाल बिस्तारै बढाउनुहोस्, बफरबाट बाहिर जानुहोस्

ठाडो गोंद नमूना कसरी गर्ने?

· ऊर्ध्वाधर ग्लु बिन्दु नमूना प्वालहरू गिलासका दुई टुक्राहरू बीच बनाइन्छ। धेरै पातलो गोंदमा, पिपेट टाउको पनि दुई गिलास प्लेटहरू बीच सम्मिलित गर्न सकिँदैन। ग्लिसरीन हेर्नुहोस्! नमूना प्वालमा पिपेट टाउको राख्नुहोस् र नमूना प्वालमा डुब्नेछ।
· बिन्दु नमूना अघि, polypropylene acyl जेल नमूना प्वाल को ठाडो बिन्दु राख्न निश्चित हुनुहोस् सफा कुल्ला छ। अनपोलिमराइज्ड एक्रिलामाइड र नमूना प्वालको फेदमा देखिने पानीलाई धुनुहोस्। पानीले नमूना प्वाललाई निकै सानो बनाउन सक्छ। 25ml वा 50ml सिरिन्ज र 18-गेज सुई प्रयोग गर्नुहोस्। इलेक्ट्रोफोरेसिस बफरमा हाल्नुहोस् र नमूना प्वाललाई सावधानीपूर्वक फ्लश गर्नुहोस्।
· नमूना प्वाल हेर्न गाह्रो हुन सक्छ, तर उही मा, बाँकी सजिलो छ। यदि त्यहाँ धेरै प्वालहरू छन् भने, नमूना बफरलाई ब्रोमोफेनोल निलोसँग परीक्षण गर्न सकिन्छ।